北京立博泰业科技有限公司
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（货号：WLN5002）原理概述：本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术：在常温恒温下，重组酶和引物形成蛋白/单链核苷酸的复合体Rec/ssDNA，在辅助蛋白和单链结合蛋白SSB的帮助下，侵入双链DNA模板
（货号：WLN5002）
原理概述：
本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术：在常温恒温下，重组酶和引物形成蛋白/单链核苷酸的复合体Rec/ssDNA，在辅助蛋白和单链结合蛋白SSB的帮助下，侵入双链DNA模板；在侵入位点形成D-loop区域，并开始对DNA双链进行扫描；待找到与引物互补的目的区域后，复合体Rec/ssDNA解体的同时，聚合酶也结合到引物的3’末端，开始链的延伸。依赖nfo酶的作用，加入根据模板设计的特异的分子探针，使用胶体金技术（三明治夹心法）可以对最终结果进行检测。
引物设计：
建议使用长度在 30-35 bp的引物，引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度；下游引物的5’端标记一个修饰基团（常用）。引物设计避免形成二级结构而影响扩增；扩增子长度建议在150-300 bp，通常不超过500 bp。
探针设计：
探针序列不与特异性引物识别位点重叠，长度为46-52 nt，序列避免回文序列、内部二级结构和连续的重复碱基。探针共有三个修饰位点：5’端修饰一个抗原标记（典型FAM）;在5’端和3’末端的中部位置标记一个dSpacer（四氢呋喃，THF），作为nfo的识别位点；3’末端标记一个修饰基团，例如胺基、磷酸基团或C3-Spacer等。
试剂盒组成：
100T/盒
| 组成 | 含量 |
| C buffer | 1 mL×2管 |
| L buffer | 500 μL×1管 |
| P-core | 1.2 mL×1管 |
| N-core | 60 μL×1管 |
| B buffer | 300 μL×1管 |
| 使用说明书 | 1份 |
试剂盒储存：
运输条件：低温运输；
储存条件：储存温度 ≤ -20 ºC，避光保存，避免重压、反复冻融；
产品有效期：6个月
操作步骤：提前将试剂盒所需组分取出，冰上或低温下融化（C buffer可室温融化），震荡混匀。
1) 向无菌0.2mL PCR管中加入20 μL C buffer、5 μL L buffer；
2) 加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探针，再加入1.5μL dNTPs(10 mM)；
3) 向反应管中加入12 μL P-core和0.6 μLN-core，（步骤1~3可以混合后再分装至反应管中）；
4) 向反应管中加入3.8 μL核酸模板；
5) 最后向反应管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（请务必上下颠倒甩动反应管8-10次进行混匀；对于多个反应，建议提前将B buffer加至反应管的盖子内侧，盖上盖后上下颠倒后混匀）；混匀后，将反应液甩（或快速离心）至管子底部，然后立即将反应管放入恒温设备中39 ºC孵育8-12 min。
6) 反应结束后，取10 μL加入含有190 μL ddH2O的离心管中，混合均匀后，将胶体金试纸条的样品端插入离心管中平衡，5 min内观察质控线与检测线判读结果。
体系配制
| 组分 | 体积（μL） |
| C buffer | 20
5 |
| L buffer | |
| P-core | 12 |
| N-core | 0.6 |
| dNTPs(10 mM) | 1.5 |
| 上游引物(10 μM) | 2 |
| 下游引物(10 μM) | 2 |
| 探针(10 μM) | 0.6 |
| 核酸模板 | 3.8 |
| B buffer | 2.5 |
| 总体积 | 50 |
| N：阴性对照； P：正对照 |
注意事项：
在进行反应时请注意避免微量核酸染，并设置空白对照实验组。
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